Лимфоциты
Лимфоциты представляют собой уникальную по разнообразию популяцию клеток, происходящих из различных поэтинчувствительных предшественников и объединяемых единой морфологией. В световом микроскопе лимфоциты имеют форму мононуклеара с грубоглыбчатой структурой округлого ядра и узким ободком цитоплазмы. Морфологическими стадиями дифференцировки лимфоцита являются лимфобласт, иммунобласт, пролимфоцит и лимфоцит. У части лимфоцитов (Влимфоцитов) конечными стадиями становятся плазмобласт, проплазмоцит и плазматическая клетка. Набор ферментов в лимфоцитах меняется в зависимости от принадлежности к определенной субпопуляции и функциональной активности [Cawley, Burns, 1980].
Подразделение лимфоцитов связано с их происхождением, функциональными особенностями и иммуноморфологической характеристикой.
По происхождению лимфоциты подразделяются на 2 основные субпопуляции: Тлимфоциты (тимусзависимые), предшественником которых является колониеобразующая клетка костного мозга; ее дифференцировка происходит под влиянием тимозина (гормона тимуса), и Влимфоциты, происходящие из колониеобразующей клетки костного мозга и развивающиеся под влиянием активаторов, не связанных с тимусом.
Среди лимфоцитов периферической крови выделяется третья сборная группа, не имеющая основных признаков (маркеров) Т и Влимфоцитов и обозначаемая как ни Т ни В, или 0субпопуляция. Клетки, входящие в ее состав, по морфологической структуее идентичны лимфоцитам, но различаются по происхождению и функциональным особенностям.
Функциональное подразделение лимфоцитов связано с их участием в иммунологической реакции: 1) лимфоциты, узнающие чужеродный антиген и дающие сигнал к началу иммунного ответа (антигенреактивные клетки, клетки иммунологической памяти); 2) лимфоциты, осуществляющие непосредственный ответ — эффекторы (цитотоксические клетки — киллеры, эффекторы гиперчувствительности замедленного типа; антителопродуценты);
3) лимфоциты, помогающие образованию эффекторов — помощники (хелперы); 4) лимфоциты, тормозящие начало и осуществляющие окончание иммунной реакции (супрессоры).
Иммуноморфологическое подразделение лимфоцитов позволяет разграничить их по функциональной принадлежности и происхождению с помощью определения на мембране набора рецепторов и антигенов, различного у каждой субпопуляции. С помощью мембранных структур клетка узнает антиген и взаимодействует с другими иммунокомпетентными клетками. Комплекс антигенных и рецепторных структур мембраны лимфоцита является иммуноморфологической характеристикой клетки. В него входят иммуноглобулины, антигены гистосовместимости, рецепторы для компонентов комплемента, гетерогенных эритроцитов, митогенов и т. д.
Среди структур, имеющихся на мембране лимфоцита, наиболее изучены антитела — иммуноглобулины (Ig). По наличию поверхностных иммуноглобулиновых молекул (Smig) различаются Smig^ лимфоциты и SmIg~AHMфоциты.
Для определения Smig используются антигенные свойства самой молекулы — ее обнаруживают с помощью антител (антисыворотки), направленных против человеческого иммуноглобулина и меченных изотопом, ферментом или флюоресцирующим веществом, делающих возможным определение места взаимодействия антигена и соединяющегося с ним антитела.
В настоящее время имеются антисыворотки, направленные не только против целой молекулы Ig, но и против ее отдельных частей.
Наиболее постоянно присутствуют на лимфоцитах антигены тканевой сомместимости, или человеческие лейкоцитарные антигены (Human Leukocytic Antigens—HLA). Кроме лимфоцитов, HLAантигены встречаются на многих других ядросодержащих клетках организма, но особое значение они имеют для иммунокомпетентньгх клеток.
HLAантигены включают 3 серологически определяемых антигена — А, В и С, а также антигены группы D, из которых часть определеется серологически, а часть — в смешанной культуре лимфоцитов.
Антигены HLA—АВС расположены на одной полипептидной цепи. В целом строение HLA—АВС системы аниигенов сходно со строением молекулы иммуноглобулина:
одна легкая цепь молекулярной массы 11600—12000 является р^микроглобулином, тяжелая цепь имеет 3 домена, молекулярная масса около 45 000. Тяжелая цепь одним концом погружена в мембрану лимфоцита, р^микроглобулин присоединен к выступающей над поверхностью части. А, В и С комплексы HLAABC расположены на тяжелой цепи [Henning, 1978]. В настоящее время определяют десятки различных индивидуальных антигенов в системе HLAABC. Основными подгруппами являются HLAA, HLAAw, HLAB, HLABw, HLACw, в каждой из которых имеется множество видов. Выраженный полиморфизм HLAABC комплекса определяет образование сильных цитотоксических антител и цитотоксических лимфоцитов против них при трансплантации тканей [Tragardh et al., 1978].
Антигены D области HLA комплекса подразделяются на HLADw и HLADRw подгруппы, в каждой из которых определяются различные специфичности.
Ряд антигенов HLADR области соответствует хорошо изученным Iaаттигенам лимфоцитов мыши, поэтому их часто обозначают как laподобные антигены [Thorsby et al., 1978]. Антигены D области представляют собой 2 полипептидных цепи —ацепь молекулярной массы 31000—33000 и рцепь молекулярной массы 24000—25000. Высокий полиморфизм этих полипептидных цепей способствует сильному иммунному ответу при встрече с чужеродными лимфоцитами. При этом молекулы HLAD (DR2 и DR3) области вызывают клеточный иммунный ответ, а молекулы HLADR области — антителообразование.
Гены, кодирующие HLAантигены, находятся в бй хромосоме в одном районе с генами иммунореактивности (Irгенами) и тесно с ними связаны, а ген, кодирующий р^микроглобулин, — в 15й хромосоме.
Рецепторы для комплемента (С) на лимфоцитах бывают 2 типов: для СЗЬ и C3d компонента комплемента. Структура рецептора не расшифрована. Они выявляются с помощью эритроцитов (Е), сенсибилизированных антителами (А) и комплементом (С), которые, присоединясь к Срецептору лимфоцитов, образуют розетку — ЕАС +лимфоцит [Rossetal, 1973].
Рецепторы для Fcфрагмента молекулы Ig. На поверхности лимфоцита могут определяться рецепторы отдельно для Fc IgG, Fc IgM и Fc IgA. Возможно, что на одном лимфоците есть рецепторы только для одного класса Ig. Нередко наличие рсрецептора для того или иного класса Ig прямо связано с функциональной направленностью клетки — хелпер или супрессор. Обозначают Рсрецептор по типам присоединяемых тяжелых цепей Ig—Рс„, Fen, Fc„.
Рецепторы для гетерогенных эритроцитов, в частности дл эритроцитов барана, обнаруживаемые на части лимфоцитов человека (Тклетках, определяются по способности присоединять гетерогенные эритроциты без предварг тельной сенсибилизации (спонтанные розетки). По наличию этих рецепторов лимфе циты подразделяются на EРОК4^ и ЕРОК~, или Е^ и Е~лимфоциты.
Наиболее удобным для дифференциации лимфоцитов по стадия созревания оказалось использование стандартных моноклональных антите.) ситтемы ОКТ (лаборатория Orthopharmaceutical), открывающих поверхност ные антигены, усоовно обозначаемые номерами от ОКТ1 до ОКТ11. Оказалось, что отдельным из, этих ОКТантигенов соответствуют вполне определенные: например, антигену ОКТ9 — трансферрин, ОКТ11 — рецептор для эритроцитов барана. Для установления дифференцировочных поверхностных маркеров Тлимфоцитов используются и несколько других моноклональных антител (см. рис. 46) — ВА, Bl, B2 (для клеток костного мозга), Leu—1—5—приготовленные лабораторией Becton—DickinsonCC°.